本片讲述了蝙蝠侠（罗杰·克雷格·史密斯 配音）与罗宾携手正义联盟成员闪电侠和绿箭侠，共同对抗名为Animilitia的犯罪组织。该组织成员皆为具有动物特征的角色，像银背大猩猩、猎豹女、杀手鳄鱼等，他们在高谭市肆意作恶，普通警察对他们毫无办法。而这个组织背后的主谋竟是蝙蝠侠的宿敌、高谭市声名显赫的黑道大亨企鹅人（达纳·斯奈德 配音）。除了Animilitia组织，蝙蝠侠等人此次还要应对奥斯瓦德公司商人新发明的邪恶网络动物机器人，一众犯罪恶势力再度在高谭市集结。